3420 伤寒Vi多糖分子大小测定法

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　　本法用于测定细菌荚膜多糖在色谱柱中的分配系数（KD）和多糖在规定KD值以前的回收率。

　　试剂、色谱柱的制备与色谱柱标定 同通则3419（

3419）第二法。

　　测定法 取供试品约1ml（含多糖抗原3～5mg），加至已标定的色谱柱中，用流动相洗脱，流速为每小时15～20ml，用组分收集器收集洗脱液，每管3～5ml。照O-乙酰基测定法（通则3117）（

通则3117）），测定每管洗脱液中O-乙酰基的含量，求出O-乙酰基含量最高时的洗脱体积，即为多糖主峰峰顶洗脱体积Ve。

　　按下式计算∶

　　式中KD为供试品分配系数；

　　Ve为供试品洗脱液体积，ml；

　　Vo为空流体积，ml；

　　Vi为柱床体积，ml。

　　计算供试品在KD值≤0.25的多糖回收率∶

　　式中Rx为KD值≤0.25供试品的多糖回收率，%；

　　Ax为供试品在KD值≤0.25各管洗脱液等体积合并液的O-乙酰基含量；

　　At为供试品所有管洗脱液等体积合并液的O-乙酰基含量。

　　【附注】过柱操作在10～20℃进行。

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