3513 人免疫球蛋白中白喉抗体效价测定法

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　　本法系依据绵羊红细胞经醛化和糅酸化处理后，具有较强的吸附蛋白质的能力，能将白喉类毒素吸附于红细胞表面上，若遇到供试品中相应抗体，会发生抗原抗体结合，产生特异性凝集，通过比较凝集反应终点测定供试品中白喉抗体效价。

　　试剂 (1)1%兔血清生理氯化钠溶液无菌采集兔全血，分离血清，置56℃、30分钟灭能。取0.5ml兔血清加49.5ml生理氯化钠溶液，混匀。

　　(2)白喉抗体诊断红细胞悬液用 1%兔血清生理氯化钠溶液复溶冻干白喉抗体诊断红细胞至5%悬液。

　　白喉抗体标准品溶液的制备 用1%兔血清生理氯化钠溶液将白喉抗体标准品稀释至每1ml含0.2HAU。

　　供试品溶液的制备 用1%兔血清生理氯化钠溶液将供试品稀释4倍。

　　测定法 在UV型血凝板上，用1%兔血清生理氯化钠溶液将供试品溶液做2倍系列稀释，每孔留25μl，再向每孔加25μl白喉抗体诊断红细胞悬液，置振荡器混匀30~60秒，放湿盒内37℃结合1小时。

　　在UV型血凝板上，用1%兔血清生理氯化钠溶液将白喉抗体标准品溶液做2倍系列稀释，每孔留25μl。自“再向每孔加25μl白喉抗体诊断红细胞悬液”起，同法操作。

　　在UV型血凝板上，加1%兔血清生理氯化钠溶液25μl，自“再向每孔加25 μl白喉抗体诊断红细胞悬液”起，同法操作，为阴性对照。

　　阴性对照孔呈典型的“-'，否则试验不成立，应重试。以出现'++'为判定终点，按下式计算供试品白喉抗体效价：

　　式中E为出现“++”的最高稀释倍数的标准品的白喉抗体效价，HAU/ml；

　　n为出现“++'的供试品的最高稀释倍数；

　　F为静注人免疫球蛋白供试品蛋白质含量，g/ml；或人免疫球蛋白供试品蛋白质含量，g/ml。

　　【附注】(1)判定标准

　　”-”红细胞集中在孔底中央，呈一边缘光滑致密的小红点；

　　”+'大部分红细胞沉于孔底中央，周围有少量的红细胞；

　　”++'红细胞部分凝集，孔底中央有一疏松的小红圈；

　　”+++”大部分红细胞凝集呈均匀分布，孔底中央有很弱的小红圈；

　　'++++”红细胞凝集呈均匀分布。

　　(2)血凝板孔要保持清洁干净，避免表面磨损，否则红细胞不易下沉，易出现假阳性。

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