黄热减毒活疫苗 - undefined - 《药典三部 - 中国药典2020年版》在线查询

　　本品系用黄热病毒减毒株接种鸡胚，经培养、收获组织、研磨、离心收获病毒上清液，加入适宜稳定剂冻干制成。用于预防黄热病。

　　1 基本要求

　　生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。

　　2 制造

　　2.1 生产用鸡胚

　　毒种传代和制备及疫苗生产用鸡胚应来源于SPF鸡群。

　　2.2 毒种

　　2.2.1 名称及来源

　　生产用毒种为黄热病毒17D-204减毒株。

　　2.2.2 种子批的建立

　　应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理及质量控制”规定。

　　2.2.3 种子批毒种的检定

　　主种子批应进行以下全面检定，工作种子批应至少进行2.2.3.1~2 .2.3.8项检定。

　　2.2.3.1 鉴别试验

　　采用蚀斑法进行鉴别试验。将病毒稀释到50~100PFU/0.4ml，分别与黄热病毒特异性免疫血清和非免疫血清等量混合，37℃±1℃水浴中和60分钟，置35℃±1℃培养7天，免疫血清组的蚀斑数比非免疫血清组的减少率应不低于80%。同时应设血清和细胞对照，均应为阴性；病毒对照（病毒量应为50~100PFU/0.4ml）应为阳性。

　　新制备的种子批用于生产时，连续制备的前三批疫苗原液应进行病毒关键基因序列测定，测定结果应与主种子批保持一致。

　　2.2.3.2 病毒滴度

　　釆用蚀斑法进行病毒滴定。将形成致密单层的Vero细胞经胰酶消化，制备成细胞浓度为约1.0×105个/ml的悬液，接种于6孔培养板内培养。两天后形成单层，移去6孔板内的培养液。取毒种进行10倍稀释，再进行4倍系列稀释，取3~4个适宜稀释度接种Vero细胞，每个稀释度病毒接种2孔，0.4ml/孔，另设细胞对照2孔；将培养板置36℃±1℃孵箱吸附1小时（每隔15分钟摇板1次），然后每孔加入0.75%羧甲基纤维素4ml，于孵箱35℃±1℃继续培养7天后倾去覆盖物，加入1%结晶紫染色液15分钟，漂洗、晾干，计算每孔30个以内的蚀斑数，以各稀释度的平均蚀斑数对应的稀释度计算PFU，应不低于5.8 lg PFU/ml。根据国家参考品计算IU值，应不低于批准的要求。

　　病毒滴度（IU/ml）=国家参考品IU值×供试品PFU值/国家参考品PFU值。

　　2.2.3.3 无菌检查

　　依法检查（通则1101）（

（通则1101）），应符合规定。

　　2.2.3.4 分枝杆菌检查

　　以草分枝杆菌（CMCC 95024）或牛分枝杆菌菌株BCG作为阳性对照菌。取阳性对照菌接种于罗氏固体培养基，于37℃培养3~5天收集培养物，以0.85%~0.90%氯化钠溶液制成菌悬液，采用细菌浊度法确定细菌含量，该菌液浊度与中国细菌浊度标准一致时活菌量约2×107CFU/ml。稀释菌悬液，取不高于100CFU的菌液作为阳性对照。

　　采用直接接种法，将供试品全部接种于适宜固体培养基［如罗氏培养基（Löwenstein Jensen medium）或Middlebrook 7H10培养基］，每种培养基做3个重复；并同时设置阳性对照（草分枝杆菌）。将接种后的培养基置于37℃培养56天，阳性对照应有菌生长，接种供试品的培养基未见分枝杆菌生长，则判为合格。

　　2.2.3.5 支原体检查

　　依法检查（通则3301）（

（通则3301）），应符合规定。

　　2.2.3.6 外源病毒因子检查

　　依法检查（通则3302）（

（通则3302）），应符合规定。

　　2.2.3.7 外源性禽白血病病毒检测

　　将供试品接种SPF鸡胚，经培养后釆用酶联免疫吸附法（通则3429）（

（通则3429））检查培养物，结果应为阴性。

　　2.2.3.8 外源性禽腺病毒检测

　　将供试品接种SPF鸡胚肝细胞培养，分别用适宜的血清学方法检测培养物中的I型和Ⅲ型腺病毒，结果应为阴性。

　　2.2.3.9 猴体试验

　　主种子批应进行猴体试验。依法检查（通则3307）（

（通则3307）），应符合规定。

　　2.2.4 毒种保存

　　种子批毒种于-60℃以下保存。

　　2.3 原液

　　2.3.1 接种鸡胚

　　将工作种子批毒种进行适当稀释，接种鸡胚卵黄囊进行培养。病毒接种量及培养条件按批准的执行。

　　2.3.2 病毒收获

　　培养70~80小时收获感染鸡胚。同一批鸡胚、同一天收获的鸡胚可合并为单一病毒收获物。

　　2.3.3 单一病毒收获物检定

　　按3.1项进行。

　　2.3.4 单一病毒收获物保存

　　于-60℃下冻存，保存时间按批准的执行。

　　3.3.5 对照鸡胚外源病毒因子检查

　　每批生产用鸡胚保留2%或至少20枚未接种病毒的鸡胚作为对照，与接种病毒的鸡胚在相同培养条件下培养，至鸡胚收获时，取对照鸡胚组织混合匀浆后，按“外源病毒因子检查法”项下“细胞培养法”和“鸡胚法”进行检查，结果均应为阴性。

　　2.3.6 研磨、离心

　　将冻存的鸡胚融化后进行合并，加入适宜的稳定剂研磨后离心。

　　2.3.7 合并

　　收取离心后上清液，来源于同一批鸡胚、同一天收获的多个单一收获物收集的病毒上清液可合并为一批原液。

　　2.3.8 原液检定

　　按3.2项进行。

　　2.3.9 原液保存

　　于-60℃以下冻存，保存时间按批准的执行。

　　2.4 半成品

　　2.4.1 配制

　　将原液按规定的同一病毒滴度进行稀释，按比例加入适宜稳定剂后即为半成品。一批或多批检定合格的原液可制成一批半成品。

　　2.4.2 半成品检定

　　按3.3项进行。

　　2.5 成品

　　2.5.1 分批

　　应符合“生物制品分包装及贮运管理”规定。

　　2.5.2 分装及冻干

　　应符合“生物制品分包装及贮运管理”规定。分装过程中的半成品疫苗应于2~8℃放置。

　　2.5.3 规格

　　按标示量复溶后每瓶0.5ml。每1次人用剂量为0.5ml，含黄热活病毒应不低于4.2lg PFU，根据国家参考品计算IU值。

　　2.5.4 包装

　　应符合“生物制品分包装及贮运管理”规定。

　　3 检定

　　3.1 单一病毒收获物检定

　　无菌检查

　　依法检查（通则1101）（

（通则1101）），应符合规定。

　　3.2 原液检定

　　3.2.1 病毒滴度

　　按2.2.3.2项进行，计算PFU，应不低于6.3lg PFU/ml。根据国家参考品计算IU值，应不低于批准的要求。

　　3.2.2 无菌检查

　　依法检查（通则1101）（

（通则1101）），应符合规定。

　　3.2.3 支原体检查

　　依法检查（通则3301）（

（通则3301）），应符合规定。

　　3.2.4 蛋白质含量

　　加稳定剂前取样测定，依法测定（通则0731第一法（

通则0731第一法）），蛋白质含量应不超过0.25mg/剂。

　　3.3 半成品检定

　　无菌检查

　　依法检查（通则1101）（

（通则1101）），应符合规定。

　　3.4 成品检定

　　3.4.1 鉴别试验

　　按2.2.3.1项进行。

　　3.4.2 外观

　　为白色疏松体，应按标示量加入所附氯化钠注射液，复溶后应为微浊澄明液体，无异物。

　　3.4.3 pH值

　　应为7.0~8.5（通则0631）（

（通则0631））。

　　3.4.4 水分

　　应不高于3.0%（通则0832）（

（通则0832））。

　　3.4.5 渗透压摩尔浓度

　　应为450~800 mOsmol/kg（通则0632）（

（通则0632））。

　　3.4.6 病毒滴度

　　取疫苗3~5瓶，溶解混匀后按2.2.3.2项进行，计算PFU，应不低于4.5lg PFU/ml。根据国家参考品计算IU值，应不低于批准的要求。

　　3.4.7 热稳定性试验

　　热稳定性试验应由生产单位在成品入库前取样测定，应与病毒滴定同时进行。于37℃±1℃放置14天后，按2.2.3.2项进行，计算PFU，应不低于4.5lg PFU/ml。根据国家参考品计算IU值，应不低于批准的要求。

　　3.4.8 无菌检查

　　依法检查（通则1101）（

（通则1101）），应符合规定。

　　3.4.9 异常毒性检查

　　依法检查（通则1141）（

（通则1141）），应符合规定。

　　3.4.10 卵清蛋白残留量

　　采用ELISA法，应不高于5μg/剂。

　　3.4.11 细菌内毒素含量

　　应不高于5EU/剂（通则1143凝胶限度试验（

通则1143凝胶限度试验））。

　　4 疫苗稀释剂

　　疫苗稀释剂为氯化钠注射液，应符合本版药典（二部）的相关要求。稀释剂的生产应符合批准的要求。

　　5 保存、运输及有效期

　　于-20℃以下避光保存，运输过程可在2~8℃冷藏条件下进行。自生产之日起，有效期为24个月。

　　6 使用说明

　　应符合“生物制品分包装及贮运管理”规定和批准的内容。