伤寒Vi多糖疫苗 - undefined - 《药典三部 - 中国药典2020年版》在线查询

　　本品系用伤寒沙门菌培养液纯化的Vi多糖，经用PBS稀释制成。用于预防伤寒。

　　1 基本要求

　　生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。

　　2 制造

　　2.1 菌种

　　生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理及质量控制”的有关规定。

　　2.1.1 名称及来源

　　生产用菌种为伤寒沙门菌Ty2株，CMCC 50098。

　　2.1.2 种子批的建立

　　应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理及质量控制”的有关规定。

　　2.1.3 种子批的传代

　　主种子批启开后传代次数不得超过5代。工作种子批启开后至接种发酵罐培养传代次数不得超过5代。

　　2.1.4 种子批的检定

　　2.1.4.1 培养特性

　　菌种接种于pH7.2～7.4的肉汤琼脂、马丁琼脂或其他适宜的培养基35～37℃培养16～20小时，应为无色半透明、边缘整齐、表面光滑湿润的圆形菌落。

　　2.1.4.2 染色镜检

　　应为革兰氏阴性杆菌。

　　2.1.4.3 生化反应

　　发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇均产酸不产气；不发酵乳糖、蔗糖（通则3605）（

（通则3605））；氧化酶试验阴性。

　　2.1.4.4 血清学试验

　　（1）玻片凝集试验

　　菌种的新鲜培养物与Vi及H-d参考血清有强凝集反应（+++以上），与Ｏ-9参考血清不产生凝集或仅有较弱凝集反应。

　　（2）定量凝集试验

　　菌种的新鲜培养物，用PBS制成6.0×108/ml的菌悬液，加入终浓度为0.5%的甲醛溶液，杀菌后的菌液（或直接用活菌菌液）与伤寒Vi参考血清做定量凝集试验；另取经100℃ 30分钟加热杀菌的菌液，与伤寒Ｏ参考血清做定量凝集试验。出现（+）凝集之血清最高稀释度为凝集反应效价，凝集效价应不低于参考血清原效价之半。

　　2.1.5 种子批的保存

　　种子批应冻干保存于8℃及以下。

　　2.2 原液

　　2.2.1 生产用种子

　　启开工作种子批菌种，检定培养特性及染色镜检合格后，接种于改良半综合培养基或其他适宜培养基，制备数量适宜的生产用种子。

　　2.2.2 生产用培养基

　　采用改良半综合培养基或经批准的其他培养基。培养基不应含有与十六烷基三甲基溴化铵能形成沉淀的成分。

　　2.2.3 培养

　　采用培养罐液体培养。在培养过程中及杀菌前取样进行菌液浓度测定及纯菌检查，涂片做革兰氏染色镜检，如发现污染杂菌，应废弃。

　　2.2.4 收获及杀菌

　　培养物于对数生长期的后期或静止期的前期收获。取样进行菌液浓度测定及纯菌检查，合格后在收获的培养液中加入甲醛溶液杀菌，杀菌条件以确保杀菌完全又不损伤其多糖抗原为宜。

　　2.2.5 纯化

　　2.2.5.1 去核酸

　　将已杀菌的培养物，离心去菌体后收集上清液，采用十六烷基三甲基溴化铵沉淀收集复合多糖。

　　2.2.5.2 沉淀多糖

　　取2.2.5.1的上清液，加入乙醇溶液沉淀多糖，沉淀物依次用无水乙醇、丙酮洗涤，沉淀物即为粗制多糖。粗制多糖应保存在－20℃以下，待纯化。

　　2.2.5.3 多糖纯化

　　将粗制多糖溶解于醋酸钠溶液中，用冷苯酚提取，离心收集上清液，并用适宜溶液透析或超滤；加入乙醇沉淀，沉淀物用无水乙醇及丙酮分别洗涤，用灭菌注射用水溶解，除菌过滤后即为多糖原液。提取过程应尽可能在15℃以下进行。

　　2.2.6 原液检定

　　按3.1项进行。

　　2.2.7 保存及有效期

　　于－20℃以下保存。自收获杀菌之日起，疫苗总有效期应不超过60个月。

　　2.3 半成品

　　2.3.1 配制

　　用适宜稀释剂稀释原液，可加入适量抑菌剂。每1次人用剂量含多糖应不低于30μg。

　　2.3.2 半成品检定

　　按3.2项进行。

　　2.4 成品

　　2.4.1 分批

　　应符合“生物制品分包装及贮运管理”规定。

　　2.4.2 分装

　　应符合“生物制品分包装及贮运管理”规定。

　　2.4.3 规格

　　每瓶5ml（10次人用剂量）、1ml（2次人用剂量）、0.5ml（1次人用剂量）。每1次人用剂量0.5ml，含多糖应不低于30μg。

　　2.4.4 包装

　　应符合“生物制品分包装及贮运管理”规定。

　　3 检定

　　3.1 原液检定

　　3.1.1 鉴别试验

　　采用免疫双扩散法（通则3403）（

（通则3403）），本品与伤寒Vi血清48小时内应形成明显沉淀线，而与伤寒Ｏ血清不形成沉淀线。

　　3.1.2 化学检定

　　3.1.2.1 固体总量

　　依法测定（通则3101）（

（通则3101））。

　　3.1.2.2 蛋白质含量

　　应小于10mg/g（通则0731第二法）。

　　3.1.2.3 核酸含量

　　3.1.2.4 Ｏ-乙酰基含量

　　应不低于2.0mmol/g（通则3117）（

（通则3117））。

　　3.1.2.5 多糖分子大小分布测定

　　多糖分子的KD值在0.25以前的洗脱液多糖回收率应在50%以上（通则3420）（

（通则3420））。

　　3.1.2.6 苯酚残留量

　　应不高于0.1g/L（通则3113）（

（通则3113））。

　　3.1.3 无菌检查

　　依法检查（通则1101）（

（通则1101）），应符合规定。

　　3.1.4 细菌内毒素检查

　　依法检查（通则1143）（

（通则1143）），应符合批准的要求。

　　3.2 半成品检定

　　无菌检查

　　依法检查（通则1101）（

（通则1101）），应符合规定。

　　3.3 成品检定

　　3.3.1 鉴别试验

　　按3.1.1项进行。

　　3.3.2 物理检查

　　3.3.2.1 外观

　　应为无色澄明液体，无异物。

　　3.3.2.2 装量

　　依法检查（通则0102）（

（通则0102）），应不低于标示量。

　　3.3.2.3 渗透压摩尔浓度

　　依法检查（通则0632）（

（通则0632）），应符合批准的要求。

　　3.3.3 化学检定

　　3.3.3.1 pH值

　　应为6.5～7.5（通则0631）（

（通则0631））。

　　3.3.3.2 抑菌剂含量

　　如添加苯酚作抑菌剂，其含量应不高于1.5mg/剂（通则3113）（

（通则3113））。

　　3.3.3.3 多糖含量

　　称取0.5～0.6g琼脂糖，加入0.05mol/L巴比妥缓冲液（pH 8.6）40ml中，加热溶胀完全，待冷却至约56℃时，加入伤寒Vi血清1ml，混匀后迅速倾倒于12cm×6cm的洁净水平玻板上，待凝胶凝固后用直径3mm的打孔器在距底边1.5cm处打孔。各孔中分别加入各稀释好的伤寒Vi抗原标准品溶液（浓度分别为：100μg/mL、50μg/ml、25μg/ml、12.5μg/ml、6.25μg/ml）和本品5μl（本品做双孔）。靠近边缘一孔中，可加入10μl溴酚蓝指示液。加样后将玻板置于电泳槽上，滤纸搭桥，加样端与电泳仪阴极相连。采用0.05mol/L巴比妥缓冲液（pH8.6）为电极缓冲液，8V/cm恒压电泳至指示剂迁移到前沿。取下玻板浸泡于0.85%～0.90%氯化钠溶液1～2小时后，覆盖洁净滤纸移至培养箱中过夜烤干。用考马斯亮蓝染色液染色至火箭峰出现，用甲醇-醋酸溶液脱色至背景清晰。准确测量火箭峰高，以标准品浓度的对数和相应的峰高作直线回归，得直线回归方程，将本品的峰高均值代入直线回归方程，求岀本品浓度。每1次人用剂量多糖含量应不低于30μg。

　　3.3.3.4 Ｏ-乙酰基含量

　　每1次人用剂量应为0.061～0.091μmol（通则3117）（

（通则3117））。

　　3.3.4 无菌检查

　　依法检查（通则1101）（

（通则1101）），应符合规定。

　　3.3.5 异常毒性检查

　　依法检查（通则1141）（

（通则1141）），应符合规定。

　　3.3.6热原检查

　　依法检查（通则1142）（

（通则1142）），注射剂量按家兔体重每1kg注射0.025μg多糖，应符合规定。

　　3.3.7 细菌内毒素检查

　　依法检查（通则1143）（

（通则1143）），应符合批准的要求。

　　4 保存、运输及有效期

　　于2～8℃避光保存和运输。自生产之日起，有效期为24个月。

　　5 使用说明

　　应符合“生物制品分包装及贮运管理”规定和批准的内容。