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何为药典方法...

摘要:所谓药典方法,顾名思义,药典专论所收载的方法,但是否每个人都知道,药典方法考虑到各个实验室的差异,有一定的可调范围。
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摘要:
一、中国药典2015规定
0512高效液相色谱法规定如下:品种正文项下规定的条件除填充剂种类、流动相组分、检测器类型不得改变外,其余如色谱柱内径与长度、填充剂粒径、流动相流速、流动相组分比例、柱温、进样量、检测器灵敏度等,均可适当改变,以达到系统适用性试验的要求。调整流动相组分比例时,当小比例组分的百分比例X小于33%时,允许改变范围为0.7X 〜1.3X ;当X大于33%时,允许改变范围为X —10%〜X+ 10%。
由上文可知,中国药典专论方法除填充剂种类、流动相组分(比例调整在规定范围内)、检测器类型不得改变外,其他条件改变了,还是认为是药典方法。但中国药典没有规定方法确认之说,所以,即使是中国药典方法,也是应该按分析方法验证的相关规定进行全套的方法验证。
二、美国药典41规定
USP41 <621>CHROMATOGRAPHY
为符合系统适用性的要求而调整的操作条件是允许的,除非专论项下另有规定,下面为所列的最大的可调范围,这些调整需要额外的确认数据。为确认新条件对方法的适用性,评估调整对相关分析性能特征存在的潜在影响。多条件的调整,将对系统性能产生累积影响,实施前需仔细考虑。
1、pH of mobile phase(HPLC):
2、Concentration of salts in buffer (HPLC):
3、Ratio of componentsin mobile phase (HPLC):
流动相中组分(≤50%)可以在此比例上再调节±30%,且任一组分比例的调节不应超过±10%(相对于总的流动相),含三组分的流动相的调节可以分组分进行,含双组分的流动相的调节可在最小的组分进行,双组份和三组分的调节实例如下:
双组分:例如流动相50:50,其中一组分50%的30%是15%,但是它超过了占总体比例±10%的规定,所以这个流动相比例的调节范围应以±10%为限,可以在不超过40:60~60:40的范围之间调节。再例如流动相比例为2:98,其中小组分2%的30%是0.6%,这个值不超过占总体比例±10%的规定,此流动相的比例可以在不超过1.4:98.6~2.6:97.4的范围之间调节。
三组分:例如流动相60:35:5,它的次组分35%的30%是10.5%,但是它超过了占总体比例±10%的规定,所以这个流动相比例中的次组分的调节范围应以±10%为限。对于最小组分5%的30%是1.5%。可以在不超过50:45:5~70:25:5或58.5:35:6.5~61.5:35:3.5的范围之间调节。
4、Wavelength ofUV-visible detector (HPLC):
5、Stationary phase
Column length(GC):可以在±70%范围内调节。
Column length(HPLC):见粒径项下。
Column inner diameter(HPLC):如果线速度保持恒定,可以调整。见HPLC流速。
Column inner diameter(GC):最大可调整至±50%。
Film thickness(capillaryGC):最大可在−50% to100%调整。
6、Particle size(HPLC):
7、Particle size (GC):
8、:
9、Flow rate (HPLC)
F2=F1×[(dc22×dp1)/(dc12×dp2)]
其中:
F1=专论中规定的流速;
对于等度洗脱,如果粒度从≥3μm变化到<3μm时,将增加线速度(通过调整流速),如果柱效不下跌20%以上,相同地,如果粒度从<3μm变化到≥3μm时,应减少线速度(流速)来避免柱效降低20%以上。梯度洗脱:流速、柱内径、粒度将不允许调整。另外,流速可以在±50%调整。(只适用于等度洗脱)
三、欧洲药典9规定
EP 2.2.46 ChromatographicSeparation Techniques规定如下:
1、液相色谱-等度洗脱
(1)Composition of themobile phase
(2)pH of the aqueouscomponent of the mobile phase
(3)Concentration ofsalts in the buffer component of a mobile phase
(4)Flow rate
(5)Column parameters
Stationary phase:固定相的属性不能改变(例如:不能用C8来代替C18);
particle size:最多可减小50%,不允许增加。
Column dimensions:
F2=F1×[(dc22×dp1)/(dc12×dp2)]
其中:
F1=专论中规定的流速,ml/min;
(6)Temperature
(7)Detector wavelength
(8)Injection volume
2、-梯度洗脱
梯度洗脱的液相条件调节需比等度洗脱的更加慎重。流动相的组成/梯度洗脱可以在符合下述条件的前提下进行小范围的调节:
满足系统适应性的条件;
主峰的出峰时间在原定保留时间的±15%以内;
流动相中最终组分的洗脱能力的强度不得弱于原规定组分;
如果系统适应性的条件达不到,则通常首选考虑滞留体积或更换柱子。
(1)Dwell volume
式中:
D:滞留体积,ml;
D0:方法开发时的滞留体积,ml;
F:流速ml/min。
如果方法的验证没有包括该步骤,用于上述目的的等度的描述可以被省略。
(2)pH of the aqueouscomponent of the mobile phase
(3)Concentration of salts in the buffer component of a mobile phase
(4)Flow rate
(5)Column parameters
Stationary phase固定相:固定相的属性不能改变(例如:不能用C8来代替C18);
particle size粒径,不允许调节。
Column dimensions柱尺寸:长度可以±70%范围内调节,内径可在±25%范围内调节。当柱的尺寸改变时,流速按照下面的公式进行计算并调节。
(6)Temperature
(7)Detector wavelength
(8)Injection volume
3、Gas chromatography气相色谱
(1)Column parameters柱参数
Stationary phase固定相:粒径最多可减少50%,不允许增加(填充柱)。膜厚可以在-50%~+100%范围内调节(毛细管柱)。
Column dimensions柱尺寸:色谱柱长度可以±70%范围内调节,色谱柱内径可以在±50%范围内调节。
(2)Flow rate流速(GC
(3)Temperature柱温(GC
(4)Injection volumeand split volume进样体积和分流比
USP与EP规定的可调范围基本一致,相较于梯度洗脱,EP药典更加谨慎,基本上不允许进行过多的调整。此外药典方法,EP与USP均要求进行方法确认,并且明确指出,药典方法可以不进行全套的验证。USP<1226>及FDA指南均有药典方法确认的相关指导,小编将接着为大家介绍。

发布于 2020-05-12 18:09:34 © 著作权归作者所有
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