在药物研发和QC岗位工作的人员在进行杂质定量时会经常遇到校正因子。那么定量过程中为什么要使用校正因子、校正因子该怎么计算、得到的校正因子结果该怎么进行使用以及验证呢？下面小编将和大家一一进行分析这些问题，让大家透彻的了解校正因子。
1、为什么要使用校正因子？
问题1：在做有关物质质量研究控制时，获得杂质是最让人头疼的一个问题，因有些杂质很难制备、稳定性差或者价格昂贵，难以长期提供杂质进行后续检测。
解决办法：
问题2：由于同一检测器对不同物质的响应值不同，所以当相同浓度的不同物质通过检测器时，产生的峰面积不一定相等，这种情况下使用峰面积进行反映待测组分的含量就会出现误差。
解决办法：
举例如下：
0.1mg/ml API的峰面积500
0.1mg/ml 杂质峰面积是250
测定某样品时检出API峰面积为500，待测组分为5。
当使用峰面积（面积归一化法）计算杂质的含量：5/500*100=1%
当使用外标法进行计算杂质的含量：5*0.1/250/0.1*100=2%
这样使用面积归一化法和外标法计算杂质结果就出现了误差。
当引入校正因子：500/250=2，进行计算杂质的含量：5*2/500*100=2%
此时计算的结果就相吻合了。
以上就是我们在样品杂质定量时需要使用校正因子的原因。
2、校正因子的含义
校正因子分为绝对校正因子和相对校正因子。
绝对校正因子：物质的检测量W与色谱响应值（峰面积等）A之间的比值
相对校正因子：某物质i与所选定的参照物质s的绝对校正因子之比
通常我们在实验过程中使用的就是相对校正因子，经常查阅USP药典的朋友会发现USP质量标准中使用的是响应因子，它是校正因子的倒数。
3、校正因子的计算
校正因子的计算方式有以下四种：
（1）单浓度点测定：制备适当浓度的特定杂质对照品溶液和主成分对照品溶液，分别进样测定，照校正因子的定义进行计算，得到校正因子。
（2）多浓度点测定：制备适当的高、中、低三水平浓度的特定杂质对照品溶液和主成分对照品溶液（涵盖定量限、标准限度），分别进样测定，照校正因子的定义计算各校正因子，计算RSD，求平均值，得到校正因子。
（3）标准曲线法测定：精密称取杂质对照品和主成分对照品，分别制备系列溶液（涵盖定量限、标准限度），分别进样后，按最小二乘法以进样量对响应值（峰面积等）进行线性回归，求得两条标准曲线，主成分和杂质的线斜率之比即为校正因子。
（4）吸收系数比值法：对于UV检测器来讲，两物质的相对校正因子实际上也是两物质以流动相为溶剂，在检测波长处的紫外吸收系数E1cm1%之比，故可按吸收系数法测定法的相关技术要求测定各自吸收系数，如对照品级别的标准物质、高中低三水平浓度测定、吸收度介于0.3～0.8之间、至少5台不同型号的UV分光光度计、2份供试液同时平行制备测定、同台仪器2份供试液的平行测定结果不超过±0.5%等。测定两物质的吸收系数后，经统计分析确定两物质吸收系数，计算比值，求得校正因子。
这四种方法我们平时应用较多的是方法1和方法3。方法1主要用于评估采用主成分自身对照法定量杂质时是否需要校正；方法3主要用来精确计算杂质的校正因子。
4、校正因子的数据处理
根据相关指导原则要求：当使用方法3计算得到的杂质校正因子在0.9～1.1的范围内，无需验证，直接采用自身对照法；若杂质的校正因子0.2～5.0之间，则需要采用加校正因子的自身对照法；若杂质的校正因子小于0.2或大于5.0，可考虑变换方法检测波长使得校正因子在0.2～5.0之间，或者使用外标法进行定量。理论上我们在做校正因子的耐用性试验时除波长的变化会对相对校正因子有所影响外，其余色谱条件的调整均不会对相对校正因子产生影响，但是色谱方法有时会因不同仪器及色谱条件的波动，可产生一定范围的误差，那么偏差在多少以内是可以接受呢？（1）当校正因子小于0.9时保留小数点后两位，当其大于1.1时保留小数点后一位,另有规定的除外。（2）当校正因子为法定标准收载的，偏差在10%以内取法定标准数值，若偏差大于10%应考察其原因，经分析为非方法和人为误差引入的，则按实际测定值作为校正因子。通过第二条规定我们看出测定的校正因子的偏差再10%以内是可以接受的，其实这个偏差10%也是根据指导原则0.9～1.1之间不控制校正因子所得。
5、使用校正因子计算杂质含量结果准确度的验证
校正因子测定结果的准确与否，我们通常使用以下方法进行验证：
一般我们在配制杂质回收率供试品溶液时同时配制自身对照溶液，然后分别按外标法和加校正因子的自身对照法测定其含量，将外标法测得值换算成百分含量与加校正因子的自身对照法的测量值进行比较以考察校正因子的准确度。使用校正因子测得结果可接受范围（X表示测得的杂质含量）：（1）当X＜0.05%，两测量值不做比较；（2）当0.05%≤X＜0.10%，两测量值的差值在0.05%内；（3）当0.10%≤X＜0.50%，两测量值的差值在0.10%内；（4）当X≥0.50%，两测量值的差值在0.20%内。
6、总结
以上是我们在使用校正因子进行定量计算时的理论基础（只有懂得理论在实验过程中处理数据才能做到游刃有余，这是我们领导经常教导我们的，也确实是一个很有意义的一句话）。下面我们看下在做校正因子的实验过程中应该注意的一些问题：
(1)选择使用做校正因子的杂质必须是对照品级别，如果不是法定的对照品需要自己进行标定。
(2)杂质对照品的溶解十分重要，切记在做实验时一定要将对照品进行完全溶解。可能有些人觉得是个小问题，但是前段时间我们实验室就因为有个项目的原料和制剂做出的校正因子不一致，结果需要重新验证。后来发现是杂质对照品的溶解的问题（使用棕色瓶有时看不太清楚，建议以后使用白色瓶称量在2mg左右先用稀释液试下溶解情况）。
(3)杂质对照品溶解后先进行定位，使用校正因子计算方法1进行粗略评估校正因子的大小，以考察应该使用什么方法计算以及对方法波长选择合理性的验证。
(4)使用杂质对照品和API配制相同的一系列的浓度进行线性试验，使用校正因子方法3计算杂质的校正因子。个人建议最好不同人不同仪器重复测定，以查验校正因子的准确与否。据了解某省所复核校正因子标准使用三台仪器进行验证三遍。
(5)最后根据回收率结果使用外标法和校正因子自身对照法进行验证校正因子计算杂质含量结果的准确性。
通过以上几步校正因子相关的实验操作就全部完成了。
